Dr. Henriette Wolf (gespielt von Brigitte Kren) hat sich ihren Posten hart erarbeitet. Wer glaubt, er habe eine kleine, ältere Dame vor sich, die keiner Fliege was zuleide tun kann, irrt sich gewaltig. Denn die Chefin der SOKO Wien ist brillant darin, Regeln in ihrem eigenen Sinn auszulegen. So verschafft sie ihrem Team oft mehr Aktionsfreiheit. Auch wenn sie sich damit manchmal am Rande der Legalität befindet. Wenn Dr. Wolf genervt oder verärgert ist, findet man sie am Schießstand – denn das ist ihre große Leidenschaft, bei der sie sehr gut nachdenken kann. Das heißt aber auch: Wenn man sie dort findet, weiß man, dass etwas im Busch ist. Private Unterstützung findet Henriette bei ihrem Mann Kurti, der als Bildhauer oft zu Hause ist und ihr den Rücken freihalten kann.

Der Neue im Team (gespielt von Martin Gruber) ist gründlich, gerechtigkeitsliebend, arbeitswütig und selbstironisch. Major Max Herzog trägt sein Herz auf der Zunge und ist immer direkt beim Fall und bei den Fakten.

Vor etwa zehn Jahren beendete Klaus Lechner (gespielt von Andreas Kiendl) seine Arbeit bei der SOKO Kitzbühel, um mit seiner Frau eine Familie in seiner Heimat, der Steiermark, zu gründen. Doch die Ehe scheiterte. Dann ist Klaus seiner Ex-Frau nach Wien gefolgt, um sein Kind regelmäßig zu sehen.
Als großer Menschenfreund kann sich der typische Steirer empathisch mit Opfern, Zeugen und Verbrechern identifizieren und bringt sie durch seine geduldige, aufmerksame Art dazu, ihre Eigenarten und Motive zu offenbaren. Trotz eines ausgeprägten Gerechtigkeitssinnes ist er nicht immer glücklich über den Ausgang seiner Ermittlungen und kann auch für einen überführten Mörder noch Verständnis aufbringen.
Seine Abneigung gegenüber klassischen „Männerdingen“, wie Autos oder Waffen, machen ihn im Machoverein Polizei manchmal zum Außenseiter, womit Klaus aber kein Problem hat. Er hat eine natürliche Autorität, die keine Bestätigung von außen braucht. Man neigt dazu, ihn zu unterschätzen. Daher setzt Klaus oft Understatement als Mittel für sich ein.

Gruppeninspektorin Penny Lanz (gespielt von Lilian Klebow) weiß, was sie will. Innerhalb des Teams der SOKO Wien hat sich Penny Lanz vor allem auf die Zusammenarbeit mit dem kriminaltechnischen Labor und der Gerichtsmedizin spezialisiert. Zudem kennt sie sich sehr gut im Internet aus. Penny Lanz ist über ihre frühere Assistentinnenrolle hinausgewachsen und leistet eigenständige, mitunter eigenwillige Ermittlungsarbeit.
Penny Lanz ist das jüngste Kind einer Wiener Großfamilie. Sie ist sehr sportlich und zuweilen ein bisschen keck. Mit ihren unkonventionellen Ermittlungsmethoden bereichert sie die SOKO Wien. Penny Lanz lässt sich von niemanden den Schneid abkaufen und stellt immer wieder ihre Kompetenz und vor allem ihre Schlagfertigkeit unter Beweis.

Die Frankfurter Pathologin Dr. Franziska "Franzi" Beck (gespielt von Maria Happel) hat sich kurz nach dem Tod ihrer großen Liebe um die frei gewordene Stelle einer Gerichtsmedizinerin in Wien beworben und diese aufgrund ihrer exzellenten Zeugnisse und Beurteilungen auch erhalten. Die zwangsläufig üppiger bemessene Freizeit eines Singles nutzt sie zu sportlicher und künstlerischer Betätigung. Eine Bowlingrunde und ein Frauenchor sind ihr im Laufe der Jahre zur Ersatzfamilie geworden.
Bei der Arbeit summt oder singt sie gedankenverloren alte Schlager aus der Vor- und Nachkriegszeit, was manches Mal zur Heiterkeit führt. Neben ihrer Schwäche fürs Essen zeichnet sie ihre Eigenwilligkeit und ihre resolute Art kontra zu geben aus.